Tratamiento de las úlceras crónicas en los miembros inferiores con un equivalente cutáneo autólogo y desbridación con larvas de Lucilia sp. (Diptera: Calliphoridae). Reporte de un caso / Chronic lower limb ulcers treatment with autologous skin equivalent and larvae debriding (Diptera Calliphoridae)

Introducción: las úlceras en los miembros inferiores constituyen una causa importante de hospitalización y deterioro en la calidad de vida de los pacientes, al interferir con sus actividades laborales y sociales. Estas lesiones obedecen a diferentes enfermedades, la más frecuente de las cuales en Medellín es la insuficiencia venosa; una vez diagnosticadas, existen muchas alternativas de tratamiento, que buscan crear un lecho apropiado para el cierre de la herida. El uso de larvas para el desbridamiento es una alternativa rápida y de bajo costo, con la cual se logra un tejido de granulación adecuado para la aplicación de equivalentes cutáneos autólogos, que constituyen una opción para pacientes refractarios a otros tratamientos. Materiales y métodos: se seleccionó y evaluó a una paciente de acuerdo con los criterios de inclusión establecidos para el estudio. Para desbridar la úlcera se recurrió a la aplicación de larvas de Lucilia sp. (Diptera: Calliphoridae), btenidas a partir de huevos previamente desinfectados con hipoclorito de sodio y sembrados en un medio de cultivo con antibióticos. Se aplicaron las larvas directamente en la lesión y posteriormente se procedió a tapar esta con muselina, permitiendo la obtención de oxígeno y facilitando el drenaje del tejido necrótico. Las larvas se dejaron por 48 horas, al cabo de las cuales se retiraron con una pinza estéril y se descartaron en alcohol al 70%; luego se procedió a evaluar la limpieza de la lesión. Este procedimiento se llevó a cabo en el Laboratorio de Entomología (GIEM) de la Universidad Antioquia. Se procesó una biopsia de piel de la paciente, obtenida siguiendo un protocolo previamente establecido, para obtener queratinocitos y fibroblastos. Para el cultivo primario de queratinocitos el 90% de las células obtenidas de la biopsia se sembró en cajas de cultivo de 75 cm2, en presencia de 7 x 106 células de la línea 3T3-Swiss tratadas con mitomicina C (10 μg/mL) como capa alimentadora; para el cultivo primario de fibroblastos, se sembró el 10% de las células en cajas de cultivo de 75 cm2 con el medio DMEM suplementado. En la producción del equivalente cutáneo se utilizó un gel obtenido con una mezcla de plasma humano de sangre AB de banco de sangre, 6-7,5 x 104 fibroblastos, CaCl2 y ácido tranexámico. Sobre dicho gel se sembraron luego los queratinocitos provenientes del cultivo primario y se hizo seguimiento del cultivo en microscopio invertido. Cuando se obtuvo una confluencia celular cercana al 100%, se desprendió el equivalente cutáneo con pinzas estériles para aplicarlo inmediatamente sobre la úlcera. Se reportan los resultados del tratamiento de una úlcera en el miembro inferior izquierdo de una paciente de 66 años con la terapia combinada de desbridamiento con larvas y cultivo de equivalentes cutáneos autólogos. Después de 15 meses de iniciado el tratamiento, la úlcera continúa cerrada y la paciente no tiene dolor ni impedimentos funcionales en la extremidad.

Transferencia de genes. Bases y aplicaciones

En la última década el enorme desarrollo de la biología molecular ha posibilitado que la tecnología del DNA recombinante se aplique a la transferencia de genes con fines terapéuticos, pasando del sueño a la realidad. Los sistemas de vectorización de los diferentes genes incluyen, a los retrovirus, adenovirus, herpesvirus, lipososmas, etc., cada uno con ventajas y desventajas, de acuerdo con la enfermedad a ser tratada y con el tejido objeto de la corrección genética. Hasta el momento aproximadamente 80 protocolos clínicos están siendo aplicados en el mundo y su número auemnta día a día. El control y regulación de la aplicación de estos protocolos implica la evaluación rigurosa de cada uno de ellos, tanto en modelos in vitro como en animales, antes de su aplicación final en el hombre. El país debe prepararse tanto científica y tecnológicamente como desde el punto de vista ético y legal, para enfrentar los retos de este nuevo enfoque terapéutico.

Determinación de anticuerpos y aloanticuerpos linfocitoxicos en pacientes candidatos a trasplante renal

Las pruebas cruzadas para detectar la presencia de anticuerpos linfocitotóxicos en el suero de candidatos a trasplante renal, son decisivas en el estudio pretrasplante. En el presente estudio se reportan los hallazgos en 97 pacientes con insificiencia renal crónica, candidatos a trasplantes y 127 posibles donantes vivos relacionados. Las pruebas incluyerón detección de anticuerpos antilifocitos T y B separadamente a 4,20 y 37 grados contra linfocitos del posible donante y contra las células autólogas. Se incluye además el tratamiento con ditiotreitol (DTT) para diferenciar entre los isotopos IgM e IgG. Los resultados muestran que 40.2 por ciento de los pacientes y 16.5 por ciento (p<=0.04) de los donantes clínicamente sanos tiene anticuerpos que pueden reaccionar con células alogénicas. Los aloanticuerpos se dectectaron en 38 por ciento de los pacientes. La mayoria de los anticuerpos estaban dirigidos contra los linfocitos B (71.7 por ciento) y correspondieron al isotipo IgM (66.7 por ciento), aunque tambien se detectaron tanto auto como aloanticuerpos IgG.No se detectó un efecto significativo de las trasfuciones o embarazos previos en el desarrollo de anticuerpos ni de aloanticuerpos. De otro lado se observó una frecuencia significativamente mayor (p=0.0009) de donantes intrafamiliares con autoanticuerpos positivos, en pacientes tambien positivos para autoanticuerpos que de receptores negativos para autoanticuerpos positivos que fueron trasplantados con riñones provenientes de sus donantes intrafamiliares o de cadáver, tienen sus injertos funcionantes hasta un año después. Los pacientes sin autoanticuerpos presentaron una menor sobrevida de sus injertos especialmente en el caso de los injertos de cadáver, de los cuales soló sobrevivió la tercera parte después de un año. Los resultados hacen énfasis en la necesidad de realizar las pruebas cruzadas previas al trasplante en condiciones que permitan obtener la mayor información posible sobre los anticuerpos linfocitotóxicos presentes en el suero de los pacientes candidatos a trasplante renal.